问:细胞破碎方法
- 答:很多,可以用渗透原理,让细胞吸水涨大而达到细胞膜破碎的目的。
例:用纯化水稀释血液
也用离心的原理让细胞破碎,如将血液放入离心机中在4000转/分的转速下离心3分钟。
需注意的是细胞破碎用的是细胞而不是组织或其他。
问:细胞破碎的方法有哪些
- 答:(1)酸碱处理:调节pH值,改变蛋白质的荷电性质,提高产物的溶解度。 (2)化学试剂处理:用表面活性剂或有机溶剂(甲苯)处理细胞,增大细胞壁的通透性,降低胞内产物的相互作用,使之容易释放。 (3)酶溶:利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞,使细胞壁受到部分或完全破坏后,再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜,进一步增大胞内产物的通透性。 酶溶的优点:操作温和,选择性强,酶能快速地破坏细胞壁,而不影响细胞内含物的质量,但缺点是酶的费用高,因而限制了它在大规模生产中的应用。 化学渗透法与机械破碎法相比:速度低,效率差,且化学或生化试剂的添加形成新的污染,给进一步的分离纯化增添麻烦。但化学渗透法选择性高,胞内产物的总释放率低,可有效抑制核酸的释放,料液粘度小,有利于后处理。
问:实验室常用哪些细胞破碎方法?
- 答:一般用物理或者化学方法来使得细胞裂解
物理法:
(1)反复冻融:将细胞反复放置于-20℃冷冻以及25-30℃环境下,反复冷冻溶解10次-20次。适用于例如血细胞等大部分哺乳动物细胞。
(2)煮沸法:与冻融法相反,将细胞放置于100℃沸水煮沸5-10分钟,适用于大部分微生物细胞。
(3)超声法:将细胞放置于超声破碎仪中,以一定频率的超声破碎细胞,适用于绝大部分微生物细胞。
(4)渗透压法:将血细胞等细胞膜较为薄弱的细胞放置于纯水等低渗溶液,细胞吸收大量水分破解。
(5)液氮法:植物细胞一般采用液氮捻磨的方法破解细胞。
化学法:
(1)强酸、强碱溶液:一般应用0.5N NaOH溶液可以裂解绝大部分动物细胞和微生物细胞。
(2)生物酶:一般用溶菌酶、蛋白酶K等酶裂解微生物细胞。