一、条件致病菌在骨伤科感染中的作用——附2947份细菌培养及药敏分析（论文文献综述）
王汉石[1]（2020）在《硫化氢对内毒素导致成骨细胞凋亡影响的研究》文中进行了进一步梳理目的:慢性骨髓炎难治愈,给患者带来了巨大的痛苦和昂贵的经济负担。慢性骨髓炎的治疗周期需要多次手术而且较长的住院时间,很多病例难以完全根治,会影响患者的生活质量以及社会的经济发展。以往认为,金黄色葡萄球菌是骨髓炎中的主要致病菌。对慢性骨髓炎致病菌谱的研究总结可以发现,目前革兰阴性杆菌比例不断升高,所以对革兰阴性杆菌在慢性骨髓炎疾病发展过程中的具体机制应该进一步研究,为针对性的疗法提供新的思路。能够代谢有机硫化物的酶普遍存在于微生物中。微生物通过释放硫化氢使硫化氢参与到微生物的许多生理过程中,例如防御抗生素,信号传递和能量代谢。与微生物相似,人体内也有多种代谢产生硫化氢的酶。硫化氢被认为是继一氧化氮和一氧化碳以后的第三种内源性信号气体分子。然而,关于硫化氢在骨髓炎感染过程中的具体作用尚不清楚。第一部分研究拟探索几种慢性骨髓炎中常见的革兰阴性杆菌在体外及体内的硫化氢释放情况,确认其释放硫化氢的浓度,并为后续的研究提供理论及实验基础。在骨髓炎期间,由于骨基质合成减少和成骨细胞凋亡率增加,新骨沉积减少,导致骨质丢失。细胞外细菌成分可能会减少成骨细胞。细胞质炎性体激活可能与自分泌/旁分泌死亡受体配体信号协同作用以诱导细胞死亡。所以,控制感染骨细胞的凋亡途径可能是限制骨髓炎炎症损伤的一种有吸引力的新方法。革兰阴性菌的主要致病物为内毒素。内毒素可以通过直接或者间接作用促进成骨细胞凋亡。Caspase家族蛋白的高度表达是凋亡发生的重要标志。凋亡启动后,细胞内底物分裂、染色质浓缩、DNA断裂、以及最终细胞死亡。除了促凋亡作用的Caspase家族,细胞的凋亡过程还受到Bcl-2家族蛋白的抗凋亡作用。目前,针对细菌性骨破坏的有效治疗仅限于抗生素方案和外科手术策略来治疗感染性骨疾病。因此研究可能恢复成骨细胞功能下降的药物仍是预防感染性骨疾病骨质破坏的主要目标。第二部分研究通过探讨革兰阴性菌产生硫化氢对其引起成骨细胞凋亡的作用,试图为新的治疗方案提供新的思路。细胞的凋亡受其内在多种信号通路的调节。近年来,PI3K/AKT信号通路已被发现在细胞多项生理活动的调节过程中起到重要作用,研究发现AKT在多种细胞中起到抗凋亡作用。另外AKT通路还可以与其他信号通路互相作用,起到抑制凋亡的作用。AKT通路下游涉及到多个信号通路。NF-κB相关通路就是其中重要的一个信号通路。激活的AKT可以磷酸化的IKK,进而磷酸化与NF-κB相连的IκB。IκB作为转录因子可以调控一系列基因表达。对AKT通路的抑制会引起对NF-κB通路的抑制,进而使细胞中生存因子的表达降低,促进细胞凋亡。多个实验发现硫化氢可以抑制AKT的磷酸化,因此,第三部分实验要验证是否硫化氢通过抑制AKT磷酸化及下游NF-κB通路激活,促进了凋亡蛋白的表达,加剧了成骨细胞的凋亡。研究方法:在体外NB培养基中培养三种细菌大肠杆菌、阴沟肠杆菌、克雷氏肺炎杆菌,分别用平板计数法制备106CFU/mL浓度的三种细菌悬液备用。将NaHS梯度稀释浓度,作为标准比较硫化氢在醋酸铅试纸上产生黑色沉淀的量。比较不同菌液和NaHS组37℃过夜后试纸上产生的黑色沉淀,估计三种细菌在培养基中产生硫化氢的量。取40只SD大鼠根据随机数法分出对照组和大肠杆菌、阴沟肠杆菌、克雷氏肺炎杆菌三种细菌实验组,每组10只。腹腔麻醉后胫骨钻孔后根据分组注射入细菌悬液或无菌NB培养基。术后三周经腹腔过量麻醉处死。处死后取大鼠胫骨标本固定后进行HE染色。并取病灶周围组织进行组织硫化氢含量测定。培养MC3T3-E1和hFOB两种成骨细胞细胞系。将MC3T3-E1和hFOB分别用梯度浓度硫化氢供体单独处理或者与LPS共同处理,培养2天后进行MTT检测,比较硫化氢单独处理或者与LPS共同处理时对细胞增殖能力的影响。将成骨细胞分为三组:（1）对照组;（2）LPS单独处理组以及（3）LPS合并硫化氢共同处理组。对三组进行流式细胞学检测、Hoechst染色以及Western blot,观察不同情况成骨细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达情况。三组细胞处理后,更换成骨诱导培养基培养,进行ALP及qPCR检测,观察不同情况对成骨细胞成骨能力的影响。对三组进行免疫荧光及Western blot检测,观察不同情况下细胞中AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。应用AKT激活剂后,进行流式细胞学,qPCR,ALP及茜素红检测,进一步检验AKT通路在凋亡及成骨过程中的作用。结果:1、革兰阴性菌可以在体外释放硫化氢,本研究的三种革兰阴性菌:大肠杆菌、阴沟肠杆菌和克雷氏肺炎杆菌,在NB培养基中均可以产生硫化氢,而且产生硫化氢的浓度在50-100μM之间。大鼠骨髓炎模型HE染色后,在镜下可见三种细菌感染后的骨组织中可见炎症细胞浸润及骨小梁结构破坏,说明细菌感染造模成功。用硫化氢检测试剂盒检测。结果显示三种细菌感染后骨髓炎局部组织中的硫化氢浓度明显升高。上述实验结果表明,大肠杆菌、阴沟肠杆菌、克雷氏肺炎杆菌三种慢性骨髓炎常见的革兰阴性菌在体内及体外均可以产生硫化氢。2、硫化氢促进LPS对成骨细胞的凋亡作用,而且加重LPS对成骨细胞增殖和成骨功能的抑制。用两种不同浓度的硫化氢供体分别处理两种成骨细胞,与对照组相比,两种成骨细胞的增值率在硫化氢0-100μM范围内均无明显降低。然而,硫化氢与LPS共同作用时,两组细胞系内的增值率均有所下降,而且呈剂量相关。说明硫化氢可以加重LPS对成骨细胞增殖的抑制效果。与LPS单独处理组相比,硫化氢与LPS共同处理组凋亡率降低而且的Hoechst染色结果显示凋亡细胞数增加,另外凋亡相关的蛋白表达也有所增加。这些结果都说明硫化氢可以促进LPS对成骨细胞凋亡作用。诱导成骨后的qPCR及ALP检验结果显示硫化氢及LPS组合组较LPS组中,成骨细胞成骨相关基因的表达以及产生ALP的量降低。这提示硫化氢能加强LPS对成骨功能的抑制。应用FAS特异性抑制剂后,成骨细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白表达降低,说明硫化氢过FAS凋亡通路影响成骨细胞的凋亡过程。3、硫化氢通过抑制AKT/NF-κB信号通路影响LPS对成骨细胞的作用。Western blot及免疫荧光结果显示,硫化氢抑制pAKT及p65蛋白表达。使用pAKT激活剂以后,pAKT表达明显升高。成骨细胞的凋亡率以及成骨能力都明显上升。另外硫化氢抑制COX-2的表达,这可能与硫化氢对成骨功能的抑制有关。结论:1、慢性骨髓炎中常见的革兰阴性菌在体外及体内都可以释放硫化氢,体外释放浓度在50-100μM之间;2、在硫化氢作用下,内毒素对成骨细胞的增殖与成骨作用起抑制作用;3、在硫化氢作用下,内毒素对成骨细胞的促凋亡水平提高;4、硫化氢与内毒素对成骨细胞的促凋亡机制与FAS凋亡通路有关;5、硫化氢通过抑制AKT/NF-κB通路引起对成骨细胞的促凋亡作用。
姜永广[2]（2016）在《骨科相关感染病原菌的分布及细菌耐药性的研究》文中提出目的调查山东省文登整骨医院2009年1月至2013年12月骨科相关感染病原菌的流行病学分布及细菌耐药情况,以期为指导临床治疗过程中选择合理的抗菌药物提供参考。方法对山东省文登整骨医院细菌室2009年1月至2013年12月期间接收标本种类、病原菌分布及耐药性进行分析,使用VITEX 2 Compact System（高级全自动细菌鉴定/药敏系统）针对细菌以及药物敏感度进行测定分析,并借助于ATBPLUS Vet3.3（微生物检验中文系统）,分析统计数据并得出相应结论。结果样本类型主要以创面分泌物（3273人份）为主。样本来源主要以四肢创伤科室（4265人份）为主。样本阳性率以痰液（62.84%）和创面分泌物（61.53%）两者最高。病原菌以G-病原菌（2460株）为主,但单菌种以金黄色葡萄球菌（586株）最多。五年内病原菌总耐药率为40.34%,耐药率前三位的病原菌是粪肠球菌（65.1%）、嗜麦芽寡养单胞菌（62.6%）和大肠埃希氏菌（61.84%）。氨苄西林、头孢唑林、红霉素、克林霉素、氨苄西林/舒巴坦这五种抗菌药物在每年都排在耐药率的前五位中,奎奴普丁和万古霉素耐药率较低。结论在我院,由于细菌对药物作用的耐受性较强,所以应当科学选择药物进行杀菌或者抑菌活性,从而使得机会感染（因受外伤免疫功能受损引起感染）和院内感染（在医院内获得感染）的机率降到最低。
洪伍华,李娟娟,林俊山[3]（2013）在《骨科伤口分泌物病原菌的分布及耐药状况分析》文中研究表明目的了解骨科伤口分泌物病原菌的分布及耐药状况,为临床治疗提供依据。方法回顾性分析2010年4月到2013年3月骨科伤口分泌物分离的病原菌及其药敏结果。结果共分离到615株病原菌,革兰阴性杆菌387株（62.9%）,革兰阳性球菌224株（36.4%）,真菌4株（0.7%）。构成比排前5位的细菌是铜绿假单胞菌99株（16.1%）、金黄色葡萄球菌98株（15.9%）、凝固酶阴性葡萄球菌98株（15.9%）、阴沟肠杆菌71株（11.5%）、大肠埃希菌58株（9.4%）。铜绿假单胞菌除复方新诺明天然耐药外,其他耐药率均低于20%;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株检出率分别为55.2%和17.1%,未出现耐碳青霉烯类的肠杆菌科细菌;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为7.1%和56.1%,未出现耐万古霉素和替考拉宁的葡萄球菌。结论革兰阴性杆菌在骨科伤口分泌物病原菌的分布中占优势,除大肠埃希菌外,其他病原菌耐药率较低,但应多种措施综合应用,预防控制骨科感染,延缓细菌耐药性的进展。
丁娟,刘尚才,常世卿,宋玉华,李少侠,李勇军,刘鲜茹,张玉振[4]（2003）在《克雷伯氏菌骨伤科感染及药敏分析》文中认为
丁娟,高飞[5]（2003）在《94例骨伤科阴沟肠杆菌感染及抗生素敏感试验结果分析》文中指出
常世卿,王苏静,刘尚才[6]（2002）在《条件致病菌在骨伤科感染中的作用——附2947份细菌培养及药敏分析》文中进行了进一步梳理为临床了解条件致病菌在骨伤科感染的作用及耐药情况。对住院治疗的 416 9例骨伤科患者的分泌物、脓液、抽出液进行了细菌培养、分离鉴定 ,并将得到的条件致病菌对常用抗生素的耐药情况进行统计总结。结果 2 947份有细菌生长 ,分离出细菌30 6 0株 ,其中条件致病菌 2 137株 ,占 6 9.84%,明显高于化脓性球菌和其他细菌的感染。在 2 137株条件致病菌中 ,以铜绿假单胞菌、变形杆菌、克雷伯氏菌属、肠杆菌属几种最为常见 ,通过对其药敏试验情况看 ,条件致病耐药性较强 ,以铜绿假单胞菌耐药性最强 ,在对常用 16种抗生素试验中耐药率 5 0 %以上有 11种 ,耐药率 90 %以上有 4种。认为条件致病菌在骨伤科感染中不但感染率高 ,且耐药性强 ,应引起临床的足够重视。
张为民,赵云芳[7]（1995）在《绿脓杆菌骨伤科感染及药敏分析》文中研究说明绿脓杆菌骨伤科感染及药敏分析河南省洛阳正骨医院正骨研究所（４７１００２）张为民河南省偃师市卫生防疫站（４７１９００）赵云芳绿脓杆菌为条件致病菌，广泛存在于土壤、大气和人体的皮肤、呼吸道、肠道之中，容易接触传染和空气传染，再加上该菌变异性大，常产生耐药...
二、条件致病菌在骨伤科感染中的作用——附2947份细菌培养及药敏分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、条件致病菌在骨伤科感染中的作用——附2947份细菌培养及药敏分析（论文提纲范文）
（1）硫化氢对内毒素导致成骨细胞凋亡影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:对革兰阴性菌在体外及体内释放硫化氢能力的研究 |
| l 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂及器材 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 革兰阴性菌培养及细菌悬液制备 |
| 2.2.2 革兰阴性菌体外释放硫化氢的检测 |
| 2.2.3 实验动物的饲养 |
| 2.2.4 实验动物的分组及骨髓炎模型制备方法 |
| 2.2.5 实验动物样品的采集 |
| 2.2.6 组织样品中硫化氢的测定 |
| 2.2.7 组织样品病理学观察 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 革兰阴性菌在体外可以释放硫化氢 |
| 3.2 革兰阴性菌在体内引发慢性骨髓炎 |
| 3.3 革兰阴性菌在体内可以释放硫化氢 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:硫化氢对内毒素诱导的成骨细胞凋亡及成骨分化能力的影响 |
| 5 前言 |
| 6 材料与方法 |
| 6.1 主要试剂和仪器 |
| 6.1.1 主要试剂及器材 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 细胞复苏 |
| 6.2.2 细胞换液和细胞传代 |
| 6.2.3 细胞冷冻保存 |
| 6.2.4 细胞计数 |
| 6.2.5 MTT细胞活性检测 |
| 6.2.6 细胞的形态学观察 |
| 6.2.7 Hoechst33342/DAPI细胞染色 |
| 6.2.8 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 6.2.9 细胞成骨诱导分化 |
| 6.2.10 Western blot检测 |
| 6.2.11 碱性磷酸酶试剂盒检测成骨能力 |
| 6.2.12 实时定量PCR检测 |
| 6.2.14 统计学分析 |
| 7 结果 |
| 7.1 硫化氢及内毒素对成骨细胞增殖情况的影响 |
| 7.2 硫化氢及内毒素对成骨细胞凋亡情况的影响 |
| 7.2.1 硫化氢加重内毒素介导的成骨细胞凋亡 |
| 7.2.2 硫化氢对内毒素介导成骨细胞凋亡相关蛋白表达影响 |
| 7.2.3 FAS特异性抑制剂减轻硫化氢对内毒素凋亡的促进作用 |
| 7.3 硫化氢及内毒素对成骨细胞成骨情况的影响 |
| 8 讨论 |
| 第三部分:硫化氢影响内毒素诱导的成骨细胞凋亡及成骨分化能力的作用机制 |
| 9 前言 |
| 10 材料与方法 |
| 10.1 主要试剂和仪器 |
| 10.1.1 主要试剂及器材 |
| 10.1.2 主要仪器 |
| 10.2 实验方法 |
| 10.2.1 Western blot检测AKT/NF-κB通路表达情况 |
| 10.2.2 免疫荧光染色检测AKT/NF-κB通路表达情况 |
| 10.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 10.2.4 qPCR对 COX-2 及成骨分化相关基因表达进行检测 |
| 10.2.5 茜素红染色 |
| 10.2.6 碱性磷酸酶试剂盒检测成骨能力 |
| 10.2.7 统计学分析 |
| 11 实验结果 |
| 11.1 硫化氢通过抑制AKT/NF-κB通路表达来促进凋亡 |
| 11.2 激活AKT通路可以改善成骨细胞凋亡 |
| 11.3 激活AKT通路可以促进成骨细胞成骨能力 |
| 11.4 硫化氢抑制COX-2表达 |
| 12 讨论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）骨科相关感染病原菌的分布及细菌耐药性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 标本来源 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 质控菌株 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验菌株的分离培养和鉴定 |
| 2.2 临床常用抗菌药物对临床菌株的药物敏感性测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床样本的基本资料信息 |
| 3.2 病原菌的检出情况 |
| 3.3 骨科相关感染病原菌的耐药性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 综述：骨科感染的病原学及相关进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（3）骨科伤口分泌物病原菌的分布及耐药状况分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 病原菌的构成 |
| 2.2 主要病原菌的耐药率 |
| 3 讨论 |
四、条件致病菌在骨伤科感染中的作用——附2947份细菌培养及药敏分析（论文参考文献）
- [1]硫化氢对内毒素导致成骨细胞凋亡影响的研究[D]. 王汉石. 中国医科大学, 2020(01)
- [2]骨科相关感染病原菌的分布及细菌耐药性的研究[D]. 姜永广. 青岛大学, 2016(03)
- [3]骨科伤口分泌物病原菌的分布及耐药状况分析[J]. 洪伍华,李娟娟,林俊山. 中国临床研究, 2013(11)
- [4]克雷伯氏菌骨伤科感染及药敏分析[J]. 丁娟,刘尚才,常世卿,宋玉华,李少侠,李勇军,刘鲜茹,张玉振. 中医正骨, 2003(12)
- [5]94例骨伤科阴沟肠杆菌感染及抗生素敏感试验结果分析[J]. 丁娟,高飞. 中原医刊, 2003(23)
- [6]条件致病菌在骨伤科感染中的作用——附2947份细菌培养及药敏分析[J]. 常世卿,王苏静,刘尚才. 中医正骨, 2002(12)
- [7]绿脓杆菌骨伤科感染及药敏分析[J]. 张为民,赵云芳. 中医正骨, 1995(06)